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一、非(fei)洲豬瘟變異株(zhu)的(de)定義(yi)

非(fei)洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)變(bian)(bian)異株(zhu)(zhu)包(bao)括基因缺失株(zhu)(zhu)、自然(ran)變(bian)(bian)異株(zhu)(zhu)、自然(ran)弱(ruo)毒(du)(du)株(zhu)(zhu)等(deng)(deng)，與(yu)2018年傳入的(de)非(fei)洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)毒(du)(du)株(zhu)(zhu)相比，該(gai)類毒(du)(du)株(zhu)(zhu)的(de)基因組序(xu)列、致(zhi)病力等(deng)(deng)發生明顯變(bian)(bian)化。生豬(zhu)感(gan)染該(gai)類毒(du)(du)株(zhu)(zhu)后(hou)，潛伏(fu)期(qi)延(yan)長，臨床表現(xian)輕微，后(hou)期(qi)可出現(xian)關節腫脹、皮膚出血型壞死(si)灶，感(gan)染母豬(zhu)產仔(zi)性能下降、死(si)淘率增高，出現(xian)流產死(si)胎(tai)/木乃伊(yi)胎(tai)等(deng)(deng)。與(yu)傳統的(de)流行(xing)毒(du)(du)株(zhu)(zhu)相比，生豬(zhu)感(gan)染該(gai)類毒(du)(du)株(zhu)(zhu)后(hou)排毒(du)(du)滴度(du)低、間隙性排毒(du)(du)，難以早期(qi)發現(xian)。

二、監測方(fang)法

（一）加強臨床巡視(shi)

時刻(ke)關注豬(zhu)(zhu)場各個環(huan)節(jie)豬(zhu)(zhu)只異常情況，想方設法提升飼養人(ren)員(yuan)責(ze)任心，一(yi)旦發(fa)現(xian)豬(zhu)(zhu)只出現(xian)嗜睡(shui)、輕(qing)觸(chu)不起、采(cai)食量減少，發(fa)熱、皮膚發(fa)紅、關節(jie)腫脹(zhang)/壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥(fei)豬(zhu)(zhu)死淘(tao)率增高，母豬(zhu)(zhu)流(liu)產或(huo)出現(xian)死胎/木乃伊胎等可(ke)疑臨床表現(xian)時，應第一(yi)時間采(cai)樣檢(jian)測。

（二）改進主動監測

每周(zhou)對豬群(qun)進(jin)行病原和抗體檢(jian)測。在(zai)豬群(qun)進(jin)行疫(yi)苗(miao)接種、轉(zhuan)群(qun)、去(qu)勢，或母(mu)豬分娩(mian)后(hou)，應進(jin)行采(cai)樣檢(jian)測。豬場出現風險暴露或周(zhou)邊豬場出現感染時，按(an)需(xu)進(jin)行采(cai)樣檢(jian)測。

（三）抽(chou)樣(yang)策(ce)略

對可疑(yi)豬(zhu)(zhu)的(de)同(tong)舍(she)和關聯舍(she)豬(zhu)(zhu)群，采(cai)(cai)集深部(bu)咽拭子(zi)和抗(kang)凝(ning)血，進行(xing)病原(yuan)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)，必(bi)要(yao)時(shi)采(cai)(cai)集血清進行(xing)抗(kang)體檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)。對可疑(yi)豬(zhu)(zhu)及臨(lin)近豬(zhu)(zhu)接(jie)觸的(de)地面、欄桿，以(yi)及舍(she)內人員接(jie)觸的(de)物(wu)品等，采(cai)(cai)集環境樣(yang)品進行(xing)病原(yuan)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)。病原(yuan)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)如果混檢(jian)(jian)，建(jian)議混樣(yang)數量不超(chao)過5個；抗(kang)體檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)不得混樣(yang)。

（四）樣品選擇

1. 對可疑豬(zhu)，按檢出概率(lv)高低排序，依次采集深(shen)部咽拭子、前腔靜脈抗(kang)凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。

2. 對分娩母豬，應采(cai)集臍帶血、胎(tai)衣；對死(si)胎(tai)和流產胎(tai)兒(er)，應采(cai)集淋巴結、脾臟等組(zu)織樣品。

3. 對(dui)病死(si)豬，優選采集部位為淋巴結(jie)、脾臟、骨髓和(he)肺臟。

4. 血清樣(yang)本，按常規方(fang)法(fa)制備。

三、檢測(ce)方(fang)法及配(pei)套(tao)

（一）采(cai)樣(yang)

豬場(chang)用戶在(zai)進行環境樣監測或者群體(ti)普查時(shi)(shi)，可(ke)在(zai)采(cai)樣時(shi)(shi)使(shi)用快靈(ling)的軟(ruan)拭子和多腔體(ti)病毒采(cai)樣管進行高效采(cai)樣及混(hun)樣。

軟拭(shi)子(zi)頭部具有(you)彈(dan)性，彈(dan)性絨毛拭(shi)子(zi)頭較容易彎曲來適(shi)應豬(zhu)場(chang)不(bu)同的異性部位(wei)，增(zeng)大采(cai)樣(yang)接觸面積，其面積比普(pu)通紡(fang)錘形拭(shi)子(zi)多2-3倍，能更多采(cai)集目標樣(yang)品。

多腔體采(cai)樣(yang)(yang)管不同于市面上傳(chuan)(chuan)統的(de)(de)(de)采(cai)樣(yang)(yang)管，其內(nei)部(bu)結構分別為洗滌(di)腔及(ji)擠存腔，洗滌(di)腔體內(nei)設有多個豎向刮擦(ca)片(pian)，對(dui)進入腔體中旋轉(zhuan)的(de)(de)(de)拭子(zi)(zi)進行(xing)接觸刮擦(ca)，幫助(zhu)絨毛表面的(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品洗脫(tuo)(tuo)釋放(fang)(fang)。多個擠存錢腔可(ke)以(yi)最多十根軟拭子(zi)(zi)，釋放(fang)(fang)了樣(yang)(yang)本后將拭子(zi)(zi)插入洗滌(di)腔上部(bu)的(de)(de)(de)擠壓腔，可(ke)將彈性植絨拭子(zi)(zi)吸(xi)附的(de)(de)(de)洗脫(tuo)(tuo)液(ye)擠壓出(chu)來并從縫隙部(bu)位(wei)回流到洗滌(di)腔。相(xiang)比傳(chuan)(chuan)統采(cai)樣(yang)(yang)管，僅用少于1/5容積的(de)(de)(de)液(ye)體就(jiu)能充分對(dui)拭子(zi)(zi)樣(yang)(yang)品進行(xing)洗滌(di)，能直接提(ti)高采(cai)樣(yang)(yang)溶液(ye)病(bing)原(yuan)濃度達5-6倍。

（二）病原檢測方法

原則上(shang)參(can)照“農(nong)辦牧〔2020〕39號(hao)”附(fu)件《非(fei)洲豬瘟病毒流行株(zhu)與基因缺失株(zhu)鑒別檢(jian)測(ce)規范》。

對采集的樣(yang)(yang)本(ben)進行核酸提(ti)取(qu)(qu)，可選用快靈(ling)的手(shou)動柱法提(ti)取(qu)(qu)試劑盒(he)，樣(yang)(yang)本(ben)量太大可使(shi)用快靈(ling)磁(ci)珠提(ti)取(qu)(qu)試劑盒(he)。

擴增時建(jian)議選用快靈ASFV流(liu)行株/基因缺失(shi)變異株鑒別(bie)試劑(ji)(ji)盒(he)(he)，即(ji)P72/MGF/CD2V鑒別(bie)試劑(ji)(ji)盒(he)(he)（下稱鑒別(bie)試劑(ji)(ji)盒(he)(he)），為了適(shi)配不同(tong)客(ke)戶的不同(tong)儀器，快靈鑒別(bie)試劑(ji)(ji)盒(he)(he)在標準試劑(ji)(ji)盒(he)(he)的基礎上進行部分優化，僅涉及檢測項目，試劑(ji)(ji)盒(he)(he)靈敏度、特異性等基本功能(neng)保持一致(zhi)，方便客(ke)戶根據不同(tong)的需求進行選擇。不同(tong)試劑(ji)(ji)盒(he)(he)性能(neng)見表1：

表(biao)1：不(bu)同鑒別試劑(ji)盒性能說明

（三）抗體檢測方(fang)法(fa)  采用間接ELISA、阻斷(duan)ELISA等方(fang)法(fa)檢測抗體水平(ping)，詳見《非洲(zhou)豬瘟診斷(duan)技術》（GB/T 18648）

抗體檢測的意(yi)義對(dui)于急性(xing)疾病(bing)的(de)爆(bao)發(fa)，病(bing)毒(du)(du)(du)(du)檢(jian)測(ce)(ce)（PCR）最有(you)用(yong)(yong)，血(xue)清學診(zhen)斷價(jia)值較低，因為感(gan)(gan)染(ran)的(de)豬(zhu)大多數在抗(kang)體產生之前死亡；非洲(zhou)豬(zhu)瘟變(bian)異株(zhu)(zhu)(zhu)（包括基(ji)因缺失(shi)株(zhu)(zhu)(zhu)、自(zi)然變(bian)異株(zhu)(zhu)(zhu)、自(zi)然弱毒(du)(du)(du)(du)株(zhu)(zhu)(zhu)等）的(de)出現(xian)，生豬(zhu)感(gan)(gan)染(ran)該類毒(du)(du)(du)(du)株(zhu)(zhu)(zhu)后(hou)，潛(qian)伏期(qi)延長，臨床表(biao)現(xian)輕微，感(gan)(gan)染(ran)該類毒(du)(du)(du)(du)株(zhu)(zhu)(zhu)后(hou)排毒(du)(du)(du)(du)滴度低、間隙性(xing)排毒(du)(du)(du)(du)，難以(yi)早(zao)期(qi)發(fa)現(xian)，因此(ci)抗(kang)體檢(jian)測(ce)(ce)的(de)作用(yong)(yong)凸顯。如果沒有(you)接種過(guo)疫苗，抗(kang)體的(de)存在表(biao)明感(gan)(gan)染(ran)過(guo)非洲(zhou)豬(zhu)瘟病(bing)毒(du)(du)(du)(du)。上海快(kuai)靈(ling)非洲(zhou)豬(zhu)瘟病(bing)毒(du)(du)(du)(du)ELISA抗(kang)體檢(jian)測(ce)(ce)試劑盒（間接法）系用(yong)(yong)大腸桿(gan)菌表(biao)達(da)的(de)非洲(zhou)豬(zhu)瘟病(bing)毒(du)(du)(du)(du)P30蛋(dan)白包被酶標(biao)板，P30蛋(dan)白是病(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)主要結構蛋(dan)白，在感(gan)(gan)染(ran)的(de)早(zao)期(qi)表(biao)達(da)和(he)分泌，可用(yong)(yong)于感(gan)(gan)染(ran)后(hou)免疫反(fan)應(ying)的(de)的(de)早(zao)期(qi)檢(jian)測(ce)(ce)。

ELISA抗體檢測原理 ELISA試劑盒是根據固相(xiang)酶聯(lian)免疫吸(xi)附試驗設計(ji)而(er)成(cheng)(cheng)的(de)(de)。在本(ben)(ben)檢測(ce)過程(cheng)中(zhong)，樣本(ben)(ben)暴(bao)露于包被在微(wei)量(liang)板孔(kong)內的(de)(de)非感染性(xing)非洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)抗(kang)原。非洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)抗(kang)體(ti)（如果檢測(ce)樣本(ben)(ben)中(zhong)存在）則將與(yu)(yu)酶標板上(shang)抗(kang)原結(jie)(jie)(jie)合(he)，經洗(xi)滌除去(qu)未結(jie)(jie)(jie)合(he)的(de)(de)其(qi)他成(cheng)(cheng)分后；再加入酶標記(ji)(ji)物(wu)，與(yu)(yu)酶標板上(shang)抗(kang)原抗(kang)體(ti)復合(he)物(wu)發生特異性(xing)結(jie)(jie)(jie)合(he)；再經洗(xi)滌除去(qu)未結(jie)(jie)(jie)合(he)的(de)(de)酶標記(ji)(ji)物(wu)，在孔(kong)中(zhong)加TMB底物(wu)液，與(yu)(yu)酶反應(ying)形成(cheng)(cheng)藍色(se)產物(wu)，顯色(se)深淺與(yu)(yu)樣品中(zhong)的(de)(de)特異性(xing)抗(kang)體(ti)含量(liang)成(cheng)(cheng)正相(xiang)關；加入終(zhong)(zhong)止液終(zhong)(zhong)止反應(ying)后，產物(wu)變為黃色(se)；用酶標儀在450nm波長測(ce)定各反應(ying)孔(kong)中(zhong)的(de)(de)吸(xi)光(guang)值，即可知(zhi)樣品是否含有(you)非洲(zhou)豬(zhu)瘟(wen)抗(kang)體(ti)。

上海快靈非洲(zhou)豬瘟(wen)病(bing)毒ELISA抗體檢測試劑盒（間(jian)接法）使用便捷、快速、敏感(gan)性高、特(te)異性強，是理想(xiang)的非洲(zhou)豬瘟(wen)病(bing)毒抗體測工具。